La aloficocianina ("otra proteína azul de algas"; del griego : ἄλλος (allos) que significa "otro", φύκος (phykos) que significa "alga" y κυανός (kyanos) que significa "azul") es una proteína de la familia de las ficobiliproteínas que captan la luz. , junto con ficocianina , ficoeritrina y ficoeritrocianina . Es un pigmento accesorio a la clorofila . Todas las ficobiliproteínas son solubles en agua y, por lo tanto, no pueden existir dentro de la membrana como los carotenoides., pero se agregan, formando racimos que se adhieren a la membrana llamados ficobilisomas . La aloficocianina absorbe y emite luz roja (650 y 660 nm máx., Respectivamente) y se encuentra fácilmente en las cianobacterias (también llamadas algas azul verdosas ) y las algas rojas . Los pigmentos de ficobilina tienen propiedades fluorescentes que se utilizan en los kits de inmunoensayo . En citometría de flujo , a menudo se abrevia APC. Para ser utilizado de manera eficaz en aplicaciones como FACS , High-Throughput Screening (HTS) y microscopía , APC debe estar químicamente reticulado.
Características estructurales
La aloficocianina se puede aislar de varias especies de algas rojas o azul verdosas, cada una de las cuales produce formas ligeramente diferentes de la molécula. Está compuesto por dos subunidades diferentes (α y β) en las que cada subunidad tiene un cromóforo de ficocianibina (PCB). La estructura de la subunidad de APC se ha determinado como (αβ) 3 . El peso molecular de APC es 105.000 Dalton.
Características espectrales
Máximo de absorción | 652 nanómetro |
Pico de absorción adicional | 625 nanómetro |
Máxima de emisión | 657,5 nanómetro |
Cambio de Stokes | 5,5 nm |
Coeficiente de extinción | 700 000 M −1 cm −1 |
Rendimiento cuántico | 0,68 |
Brillo | 1,6 x 10 5 M −1 cm −1 |
APC reticulado
Como se mencionó anteriormente, para que APC sea útil en inmunoensayos, primero debe reticularse químicamente para evitar que se disocie en sus subunidades componentes cuando se encuentra en tampones fisiológicos comunes. [1] El método convencional para lograr esto es a través de un proceso destructivo en el que el trímero de APC tratado se rompe químicamente en urea 8 M y luego se deja volver a asociar en un tampón fisiológico. [2] Se puede utilizar un método alternativo que preserve la integridad estructural del trímero APC y permita un producto final más brillante y estable. [3]
Aplicaciones
Se desarrollaron muchas aplicaciones e instrumentos específicamente para la alophycocyanin. Se utiliza comúnmente en inmunoensayos como FACS , citometría de flujo y cribado de alto rendimiento como aceptor de europio a través de ensayos de transferencia de energía por resonancia de fluorescencia resuelta en el tiempo (TR-FRET) .
Referencias
- ^ Papageorgiou GC, Lagoyanni T (septiembre de 1983). "Efectos de los electrolitos caotrópicos sobre la estructura y el acoplamiento de excitación electrónica de los ficobilisomas reticulados con glutaraldehído y diimido éster". Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Bioenergética . 724 (3): 323–32. doi : 10.1016 / 0005-2728 (83) 90091-9 .
- ^ Yeh SW, Ong LJ, Clark JH, Glazer AN (enero de 1987). "Propiedades de fluorescencia de la aloficocianina y un trímero de aloficocianina reticulado" . Citometría . 8 (1): 91–5. doi : 10.1002 / cyto.990080113 . PMID 3100257 .
- ^ US concedió 7256050 , " Aloficocianina reticulada de alta intensidad fluorescente", asignada a Columbia Biosciences Corp.