Un vector de expresión , también conocido como construcción de expresión , es normalmente un plásmido o virus diseñado para la expresión génica en las células. El vector se utiliza para introducir un gen específico en una célula diana y puede controlar el mecanismo de síntesis de proteínas de la célula para producir la proteína codificada por el gen. Los vectores de expresión son las herramientas básicas en biotecnología para la producción de proteínas .
El vector está diseñado para contener secuencias reguladoras que actúan como regiones potenciadoras y promotoras y conducen a una transcripción eficiente del gen transportado en el vector de expresión. [1] El objetivo de un vector de expresión bien diseñado es la producción eficiente de proteínas, y esto puede lograrse mediante la producción de una cantidad significativa de ARN mensajero estable , que luego puede traducirse en proteína. La expresión de una proteína puede controlarse estrictamente y la proteína solo se produce en una cantidad significativa cuando es necesario mediante el uso de un inductor ; en algunos sistemas, sin embargo, la proteína puede expresarse de manera constitutiva. Escherichia coli se usa comúnmente como hospedador para la producción de proteínas , pero también se pueden usar otros tipos de células. Un ejemplo del uso de un vector de expresión es la producción de insulina , que se usa para tratamientos médicos de la diabetes .
Elementos
Un vector de expresión tiene características que puede tener cualquier vector , como un origen de replicación , un marcador seleccionable y un sitio adecuado para la inserción de un gen como el sitio de clonación múltiple . El gen clonado puede transferirse de un vector de clonación especializado a un vector de expresión, aunque es posible clonar directamente en un vector de expresión. El proceso de clonación se realiza normalmente en Escherichia coli . Los vectores utilizados para la producción de proteínas en organismos distintos de E. coli pueden tener, además de un origen de replicación adecuado para su propagación en E. coli , elementos que les permitan mantenerse en otro organismo, y estos vectores se denominan vectores lanzadera .
Elementos de expresión
Un vector de expresión debe tener los elementos necesarios para la expresión génica. Estos pueden incluir un promotor , la secuencia de inicio de la traducción correcta tal como un sitio de unión ribosómico y un codón de inicio , un codón de terminación y una secuencia de terminación de la transcripción . [2] Existen diferencias en la maquinaria para la síntesis de proteínas entre procariotas y eucariotas, por lo tanto, los vectores de expresión deben tener los elementos de expresión que sean apropiados para el huésped elegido. Por ejemplo, los vectores de expresión de procariotas tendrían una secuencia de Shine-Dalgarno en su sitio de inicio de la traducción para la unión de ribosomas, mientras que los vectores de expresión de eucariotas contendrían la secuencia consenso de Kozak .
El promotor inicia la transcripción y, por tanto, es el punto de control de la expresión del gen clonado. Los promotores utilizados en el vector de expresión normalmente son inducibles , lo que significa que la síntesis de proteínas solo se inicia cuando se requiere mediante la introducción de un inductor como IPTG . Sin embargo, la expresión génica también puede ser constitutiva (es decir, la proteína se expresa constantemente) en algunos vectores de expresión. Puede producirse un bajo nivel de síntesis de proteínas constitutivas incluso en vectores de expresión con promotores estrictamente controlados.
Etiquetas de proteína
Después de la expresión del producto génico, puede ser necesario purificar la proteína expresada; sin embargo, separar la proteína de interés de la gran mayoría de las proteínas de la célula huésped puede ser un proceso prolongado. Para facilitar este proceso de purificación, se puede agregar una etiqueta de purificación al gen clonado. Esta etiqueta podría ser una etiqueta de histidina (His) , otros péptidos marcadores o socios de fusión como la glutatión S-transferasa o la proteína de unión a maltosa . [3] Algunos de estos socios de fusión también pueden ayudar a aumentar la solubilidad de algunas proteínas expresadas. Otras proteínas de fusión, como la proteína verde fluorescente, pueden actuar como un gen indicador para la identificación de genes clonados con éxito, o pueden usarse para estudiar la expresión de proteínas en la formación de imágenes celulares . [4] [5]
Otros
El vector de expresión se transforma o transfecta en la célula huésped para la síntesis de proteínas. Algunos vectores de expresión pueden tener elementos para la transformación o la inserción de ADN en el cromosoma del huésped, por ejemplo, los genes vir para la transformación de plantas y sitios de integrasa para la integración cromosómica.
Algunos vectores pueden incluir una secuencia de dirección que puede dirigir la proteína expresada a una ubicación específica, como el espacio periplásmico de las bacterias.
Sistemas de expresión / producción
Pueden usarse diferentes organismos para expresar la proteína diana de un gen y, por lo tanto, el vector de expresión usado tendrá elementos específicos para su uso en el organismo particular. El organismo más utilizado para la producción de proteínas es la bacteria Escherichia coli . Sin embargo, no todas las proteínas pueden expresarse con éxito en E. coli , o expresarse con la forma correcta de modificaciones postraduccionales tales como glicosilaciones y, por lo tanto, pueden usarse otros sistemas.
Bacteriano
El huésped de expresión de elección para la expresión de muchas proteínas es Escherichia coli, ya que la producción de proteína heteróloga en E. coli es relativamente simple y conveniente, además de rápida y barata. También hay disponible una gran cantidad de plásmidos de expresión de E. coli para una amplia variedad de necesidades. Otras bacterias utilizadas para la producción de proteínas incluyen Bacillus subtilis .
La mayoría de las proteínas heterólogas se expresan en el citoplasma de E. coli . Sin embargo, no todas las proteínas formadas pueden ser solubles en el citoplasma y las proteínas plegadas incorrectamente formadas en el citoplasma pueden formar agregados insolubles llamados cuerpos de inclusión . Dichas proteínas insolubles requerirán replegamiento, lo que puede ser un proceso complicado y no necesariamente producir un alto rendimiento. [6] Las proteínas que tienen enlaces disulfuro a menudo no pueden plegarse correctamente debido al entorno reductor en el citoplasma que previene la formación de dichos enlaces, y una posible solución es dirigir la proteína al espacio periplásmico mediante el uso de un terminal N secuencia de señales . Otra posibilidad es manipular el entorno redox del citoplasma. [7] También se están desarrollando otros sistemas más sofisticados; tales sistemas pueden permitir la expresión de proteínas que antes se creían imposibles en E. coli , como las proteínas glicosiladas . [8] [9] [10]
Los promotores utilizados para estos vectores se basan generalmente en el promotor del operón lac o el promotor T7 , [11] y normalmente están regulados por el operador lac . Estos promotores también pueden ser híbridos de diferentes promotores, por ejemplo, Tac-Promoter es un híbrido de los promotores trp y lac . [12] Nótese que los promotores lac o derivados de lac más comúnmente usados se basan en el mutante lac UV5 que es insensible a la represión de catabolitos . Este mutante permite la expresión de proteína bajo el control del promotor lac cuando el medio de crecimiento contiene glucosa, ya que la glucosa inhibiría la expresión génica si se usa el promotor lac de tipo salvaje . [13] No obstante, la presencia de glucosa todavía puede usarse para reducir la expresión de fondo a través de la inhibición residual en algunos sistemas. [14]
Ejemplos de vectores de expresión de E. coli son la serie pGEX de vectores donde la glutatión S-transferasa se utiliza como socio de fusión y la expresión génica está bajo el control del promotor tac, [15] [16] [17] y la serie pET de vectores que utilizan un promotor T7 . [18]
Es posible expresar simultáneamente dos o más proteínas diferentes en E. coli utilizando diferentes plásmidos. Sin embargo, cuando se usan 2 o más plásmidos, cada plásmido necesita usar una selección de antibiótico diferente, así como un origen de replicación diferente, de lo contrario, es posible que uno de los plásmidos no se mantenga de manera estable. Muchos plásmidos de uso común se basan en el replicón ColE1 y, por lo tanto, son incompatibles entre sí; Para que un plásmido basado en ColE1 coexista con otro en la misma célula, el otro necesitaría ser de un replicón diferente, por ejemplo, un plásmido basado en replicón p15A tal como la serie de plásmidos pACYC. [19] Otro enfoque sería utilizar un solo vector de dos cistrones o diseñar las secuencias codificantes en tándem como una construcción bi o policistrónica. [20] [21]
Levadura
Una levadura comúnmente utilizada para la producción de proteínas es Pichia pastoris . [22] Ejemplos de vector de expresión de levadura en Pichia son la serie de vectores pPIC, y estos vectores utilizan el promotor AOX1 que es inducible con metanol . [23] Los plásmidos pueden contener elementos para la inserción de ADN extraño en el genoma de la levadura y la secuencia señal para la secreción de proteína expresada. Las proteínas con enlaces disulfuro y glicosilación se pueden producir de manera eficiente en levadura. Otra levadura utilizada para la producción de proteínas es Kluyveromyces lactis y el gen se expresa, impulsado por una variante del fuerte promotor de lactasa LAC4. [24]
Saccharomyces cerevisiae se usa particularmente ampliamente para estudios de expresión génica en levadura, por ejemplo, en el sistema de dos híbridos de levadura para el estudio de la interacción proteína-proteína. [25] Los vectores utilizados en el sistema de dos híbridos de levadura contienen socios de fusión para dos genes clonados que permiten la transcripción de un gen indicador cuando hay interacción entre las dos proteínas expresadas a partir de los genes clonados.
Baculovirus
El baculovirus , un virus en forma de bastón que infecta células de insectos, se utiliza como vector de expresión en este sistema. [26] Las líneas celulares de insectos derivadas de lepidópteros (polillas y mariposas), como Spodoptera frugiperda , se utilizan como hospedadores. Una línea celular derivada de la picadora de repollo es de particular interés, ya que ha sido desarrollada para crecer rápidamente y sin el costoso suero que normalmente se necesita para estimular el crecimiento celular. [27] [28] El vector lanzadera se llama bácmido y la expresión génica está bajo el control de un promotor fuerte pPolh. [29] El baculovirus también se ha utilizado con líneas celulares de mamíferos en el sistema BacMam . [30]
El baculovirus se usa normalmente para la producción de glicoproteínas , aunque las glicosilaciones pueden ser diferentes de las que se encuentran en los vertebrados. En general, es más seguro de usar que el virus de los mamíferos, ya que tiene un rango de hospedadores limitado y no infecta a los vertebrados sin modificaciones.
Planta
Muchos vectores de expresión de plantas se basan en el plásmido Ti de Agrobacterium tumefaciens . [31] En estos vectores de expresión, el ADN que se insertará en la planta se clona en el ADN-T , un tramo de ADN flanqueado por una secuencia repetida directa de 25 pb en cada extremo, y que puede integrarse en el genoma de la planta. El T-DNA también contiene el marcador seleccionable. El Agrobacterium proporciona un mecanismo para la transformación , la integración de en el genoma vegetal, y los promotores para sus vir genes también se puede usar para los genes clonados. Sin embargo, las preocupaciones sobre la transferencia de material genético bacteriano o viral a la planta han llevado al desarrollo de vectores llamados vectores intragénicos mediante los cuales se utilizan equivalentes funcionales del genoma de la planta para que no haya transferencia de material genético de una especie exótica a la planta. [32]
Los virus de plantas pueden usarse como vectores, ya que el método de Agrobacterium no funciona para todas las plantas. Ejemplos de virus de plantas utilizados son el virus del mosaico del tabaco (TMV), el virus X de la patata y el virus del mosaico del caupí . [33] La proteína puede expresarse como una fusión con la proteína de la cubierta del virus y se muestra en la superficie de las partículas virales ensambladas, o como una proteína no fusionada que se acumula dentro de la planta. La expresión en plantas usando vectores vegetales es a menudo constitutiva, [34] y un promotor constitutivo comúnmente usado en vectores de expresión vegetal es el promotor 35S del virus del mosaico de la coliflor (CaMV). [35] [36]
Mamífero
Los vectores de expresión de mamíferos ofrecen ventajas considerables para la expresión de proteínas de mamíferos sobre los sistemas de expresión bacterianos: plegamiento adecuado, modificaciones postraduccionales y actividad enzimática relevante. También puede ser más deseable que otros sistemas eucariotas de no mamíferos en los que las proteínas expresadas pueden no contener las glicosilaciones correctas. Es de uso particular en la producción de proteínas que se asocian a la membrana que requieren chaperonas para un plegamiento y estabilidad adecuados, además de contener numerosas modificaciones postraduccionales. Sin embargo, la desventaja es el bajo rendimiento de producto en comparación con los vectores procarióticos, así como la naturaleza costosa de las técnicas involucradas. Su complicada tecnología y la posible contaminación con virus animales de expresión de células de mamíferos también han limitado su uso en la producción industrial a gran escala. [37]
Las líneas de células de mamífero cultivadas como el ovario de hámster chino (CHO) , COS , incluidas las líneas de células humanas como HEK y HeLa, pueden usarse para producir proteína. Los vectores se transfectan en las células y el ADN se puede integrar en el genoma mediante recombinación homóloga en el caso de una transfección estable, o las células se pueden transfectar transitoriamente. Ejemplos de vectores de expresión de mamíferos incluyen los vectores adenovirales , [38] la serie pSV y pCMV de vectores plasmídicos, vaccinia y vectores retrovirales , [39] así como baculovirus. [30] Los promotores del citomegalovirus (CMV) y SV40 se utilizan comúnmente en vectores de expresión de mamíferos para impulsar la expresión génica. También se conoce un promotor no viral, como el promotor del factor de elongación (EF) -1. [40]
Sistemas sin células
El lisado de células de E. coli que contiene los componentes celulares necesarios para la transcripción y traducción se usa en este método in vitro de producción de proteínas. La ventaja de tal sistema es que la proteína se puede producir mucho más rápido que las producidas in vivo, ya que no requiere tiempo para cultivar las células, pero también es más costoso. Los vectores usados para la expresión de E. coli pueden usarse en este sistema, aunque también están disponibles vectores diseñados específicamente para este sistema. Los extractos de células eucariotas también se pueden usar en otros sistemas sin células, por ejemplo, los sistemas de expresión sin células de germen de trigo . [41] También se han producido sistemas libres de células de mamíferos. [42]
Aplicaciones
Uso de laboratorio
El vector de expresión en un huésped de expresión es ahora el método habitual utilizado en los laboratorios para producir proteínas para la investigación. La mayoría de las proteínas se producen en E. coli , pero para las proteínas glicosiladas y aquellas con enlaces disulfuro, se pueden usar levaduras, baculovirus y sistemas de mamíferos.
Producción de péptidos y proteínas farmacéuticas.
La mayoría de los productos farmacéuticos proteicos se producen ahora mediante tecnología de ADN recombinante utilizando vectores de expresión. Estos productos farmacéuticos de péptidos y proteínas pueden ser hormonas, vacunas, antibióticos, anticuerpos y enzimas. [43] La primera proteína recombinante humana utilizada para el manejo de enfermedades, la insulina, se introdujo en 1982. [43] La biotecnología permite que estos péptidos y proteínas farmacéuticas, algunos de los cuales antes eran raros o difíciles de obtener, se produzcan en grandes cantidades. También reduce los riesgos de contaminantes como virus hospedadores, toxinas y priones . Ejemplos del pasado incluyen la contaminación por priones en la hormona del crecimiento extraída de las glándulas pituitarias extraídas de cadáveres humanos, que causó la enfermedad de Creutzfeldt-Jakob en pacientes que recibieron tratamiento para el enanismo , [44] y contaminantes virales en el factor VIII de coagulación aislado de sangre humana que resultó en la transmisión de enfermedades virales como la hepatitis y el SIDA . [45] [46] Este riesgo se reduce o elimina por completo cuando las proteínas se producen en células hospedadoras no humanas.
Plantas y animales transgénicos
En los últimos años, se han utilizado vectores de expresión para introducir genes específicos en plantas y animales para producir organismos transgénicos , por ejemplo en agricultura se utiliza para producir plantas transgénicas . Se han utilizado vectores de expresión para introducir un precursor de vitamina A , betacaroteno , en plantas de arroz. Este producto se llama arroz dorado . Este proceso también se ha utilizado para introducir un gen en plantas que produce un insecticida , llamado toxina Bacillus thuringiensis o toxina Bt que reduce la necesidad de que los agricultores apliquen insecticidas ya que es producido por el organismo modificado. Además, los vectores de expresión se utilizan para extender la madurez de los tomates alterando la planta para que produzca menos del químico que hace que los tomates se pudran. [47] Ha habido controversias sobre el uso de vectores de expresión para modificar cultivos debido al hecho de que podría haber riesgos para la salud desconocidos, las posibilidades de que las empresas patenten ciertos cultivos alimentarios genéticamente modificados y preocupaciones éticas. Sin embargo, esta técnica todavía se está utilizando y se está investigando mucho.
También se han producido animales transgénicos para estudiar procesos bioquímicos animales y enfermedades humanas, o se han utilizado para producir productos farmacéuticos y otras proteínas. También pueden diseñarse para tener características ventajosas o útiles. La proteína verde fluorescente se usa a veces como etiquetas, lo que da como resultado animales que pueden emitir fluorescencia, y esto se ha explotado comercialmente para producir GloFish fluorescente .
Terapia de genes
La terapia génica es un tratamiento prometedor para una serie de enfermedades en las que un gen "normal" transportado por el vector se inserta en el genoma, para reemplazar un gen "anormal" o complementar la expresión de un gen particular. Generalmente se utilizan vectores virales, pero se están desarrollando otros métodos de administración no virales. El tratamiento sigue siendo una opción de riesgo debido al vector viral utilizado que puede causar efectos nocivos, por ejemplo, dar lugar a una mutación insercional que puede resultar en cáncer. [48] [49] Sin embargo, se han obtenido resultados prometedores. [50] [51]
Ver también
- Vector de clonación
- Proteína de la célula huésped
Referencias
- ^ sci.sdsu.edu
- ^ RW Old, SB Primrose (1994). "Capítulo 8: Expresión de E. coli de moléculas de ADN clonadas" . Principios de manipulación genética . Publicaciones científicas de Blackwell. ISBN 9780632037124.Mantenimiento de CS1: utiliza el parámetro de autores ( enlace )
- ^ Michelle E. Kimple, Allison L. Brill y Renee L. Pasker (24 de septiembre de 2013). "Descripción general de las etiquetas de afinidad para la purificación de proteínas" . Protocolos actuales en la ciencia de las proteínas . 73 (Unidad-9.9): 9.9.1–9.9.23. doi : 10.1002 / 0471140864.ps0909s73 . ISBN 9780471140863. PMC 4527311 . PMID 24510596 .Mantenimiento de CS1: utiliza el parámetro de autores ( enlace )
- ^ Erik Snapp (julio de 2005). "Diseño y uso de proteínas de fusión fluorescentes en biología celular" . Protocolos actuales en biología celular . Capítulo 21: 21.4.1-21.4.13. 27 : 21.4.1–21.4.13. doi : 10.1002 / 0471143030.cb2104s27 . PMC 2875081 . PMID 18228466 .Mantenimiento de CS1: ubicación ( enlace )
- ^ Georgeta Crivat y Justin W. Taraska (enero de 2012). "Imágenes de proteínas dentro de las células con etiquetas fluorescentes" . Tendencias en biotecnología . 30 (1): 8–16. doi : 10.1016 / j.tibtech.2011.08.002 . PMC 3246539 . PMID 21924508 .Mantenimiento de CS1: utiliza el parámetro de autores ( enlace )
- ^ Burgess RR (2009). "Proteínas de cuerpos de inclusión solubilizados replegables". Métodos en enzimología . 463 : 259–82. doi : 10.1016 / S0076-6879 (09) 63017-2 . ISBN 9780123745361. PMID 19892177 .
- ^ Julie Lobstein, Charlie A Emrich, Chris Jeans, Melinda Faulkner, Paul Riggs y Mehmet Berkmen (2012). "SHuffle, una nueva cepa de expresión de proteínas de Escherichia coli capaz de plegar correctamente proteínas unidas por disulfuro en su citoplasma" . Fábricas de células microbianas . 11 : 56. doi : 10.1186 / 1475-2859-11-56 . PMC 3526497 . PMID 22569138 .Mantenimiento de CS1: utiliza el parámetro de autores ( enlace )
- ^ Wacker M, Linton D, Hitchen PG, Nita-Lazar M, Haslam SM, North SJ, Panico M, Morris HR, Dell A, Wren BW, Aebi M (2002). "Glicosilación ligada a N en Campylobacter jejuni y su transferencia funcional a E. coli". Ciencia . 298 (5599): 1790-1793. Código Bibliográfico : 2002Sci ... 298.1790W . doi : 10.1126 / science.298.5599.1790 . PMID 12459590 .
- ^ Huang CJ, Lin H, Yang X (2012). "Producción industrial de terapias recombinantes en Escherichia coli y sus avances recientes". J Ind Microbiol Biotechnol . 39 (3): 383–99. doi : 10.1007 / s10295-011-1082-9 . PMID 22252444 . S2CID 15584320 .
- ^ Germán L. Rosano1 y Eduardo A. Ceccarelli (2014). "Expresión de proteínas recombinantes en Escherichia coli: avances y desafíos" . Fronteras en microbiología . 5 : 172. doi : 10.3389 / fmicb.2014.00172 . PMC 4029002 . PMID 24860555 .Mantenimiento de CS1: utiliza el parámetro de autores ( enlace )
- ^ Dubendorff JW, Studier FW (1991). "Control de la expresión basal en un sistema de expresión de T7 inducible bloqueando el promotor de T7 diana con el represor lac". Revista de Biología Molecular . 219 (1): 45–59. doi : 10.1016 / 0022-2836 (91) 90856-2 . PMID 1902522 .
- ^ deBoer HA, Comstock, LJ, Vasser, M. (1983). "El promotor tac: un híbrido funcional derivado de los promotores trp y lac" . Actas de la Academia Nacional de Ciencias de EE . UU . 80 (1): 21-25. Código Bibliográfico : 1983PNAS ... 80 ... 21D . doi : 10.1073 / pnas.80.1.21 . PMC 393301 . PMID 6337371 .CS1 maint: varios nombres: lista de autores ( enlace )
- ^ Silverstone AE, Arditti RR, Magasanik B (1970). "Revertientes insensibles a catabolitos de mutantes del promotor lac" . Actas de la Academia Nacional de Ciencias de EE . UU . 66 (3): 773–9. Código bibliográfico : 1970PNAS ... 66..773S . doi : 10.1073 / pnas.66.3.773 . PMC 283117 . PMID 4913210 .
- ^ Robert Novy; Barbara Morris. "Uso de glucosa para controlar la expresión basal en el sistema pET" (PDF) . InNovations (13): 6–7.
- ^ Smith DB, Johnson KS (1988). "Purificación en un solo paso de polipéptidos expresados en Escherichia coli como fusiones con glutatión S-transferasa". Gene . 67 (1): 31–40. doi : 10.1016 / 0378-1119 (88) 90005-4 . PMID 3047011 .
- ^ "Sistema de fusión de genes GST" (PDF) . Amersham Pharmacia biotech .
- ^ "Vectores pGEX" . GE Healthcare Lifesciences.
- ^ "Manual del sistema pET" (PDF) . Novagen .
- ^ Nicola Casali; Andrew Preston (3 de julio de 2003). Vectores de plásmidos de E. coli: métodos y aplicaciones . Métodos en Biología Molecular. Volumen No .: 235. p. 22. ISBN 978-1-58829-151-6.
|volume=
tiene texto extra ( ayuda ) - ^ "Métodos de clonación - Clonación di o multicistrónica" . EMBL .
- ^ Schoner BE, Belagaje RM, Schoner RG (1986). "Traducción de un ARNm sintético de dos cistrones en Escherichia coli" . Proc Natl Acad Sci USA . 83 (22): 8506–10. Código bibliográfico : 1986PNAS ... 83.8506S . doi : 10.1073 / pnas.83.22.8506 . PMC 386959 . PMID 3534891 .
- ^ Cregg JM, Cereghino JL, Shi J, Higgins DR (2000). "Expresión de proteína recombinante en Pichia pastoris". Biotecnología molecular . 16 (1): 23–52. doi : 10.1385 / MB: 16: 1: 23 . PMID 11098467 . S2CID 35874864 .
- ^ "Sistema de expresión de Pichia pastoris" (PDF) . Invitrogen .
- ^ "Kit de expresión de proteínas K. lactis" (PDF) . New England Biolabs Inc .
- ^ Fields S, Song O (1989). "Un nuevo sistema genético para detectar interacciones proteína-proteína". Naturaleza . 340 (6230): 245–6. Código Bibliográfico : 1989Natur.340..245F . doi : 10.1038 / 340245a0 . PMID 2547163 . S2CID 4320733 .
- ^ Mckenzie, Samuel (26 de febrero de 2019). "El sistema de vectores de expresión de baculovirus (BEVS)" . news-medical.net .
- ^ HINK, WF (2 de mayo de 1970). "Establecida línea de células de insecto del repollo Looper, Trichoplusia ni". Naturaleza . 226 (5244): 466–467. Código Bibliográfico : 1970Natur.226..466H . doi : 10.1038 / 226466b0 . ISSN 1476-4687 . PMID 16057320 . S2CID 4225642 .
- ^ Zheng GL, Zhou HX, Li CY (2014). "El cultivo sin suero de la línea celular en suspensión QB-Tn9-4s del looper de la col, Trichoplusia ni, es altamente productivo para la replicación del virus y la expresión de proteínas recombinantes" . Revista de ciencia de insectos . 14 (1): 24. doi : 10.1093 / jis / 14.1.24 . PMC 4199540 . PMID 25373171 .
- ^ "Guía de sistemas de vectores de expresión de baculovirus (BEVS) y técnicas de cultivo de células de insectos" (PDF) . Invitrogen .
- ^ a b Kost, T; Condreay, JP (2002). "Baculovirus recombinantes como vectores de suministro de genes de células de mamífero". Tendencias en biotecnología . 20 (4): 173–180. doi : 10.1016 / S0167-7799 (01) 01911-4 . PMID 11906750 .
- ^ Walden R, Schell J (1990). "Técnicas en biología molecular vegetal: avances y problemas" . Revista europea de bioquímica . 192 (3): 563–76. doi : 10.1111 / j.1432-1033.1990.tb19262.x . PMID 2209611 .
- ^ George Acquaah (16 de agosto de 2012). Principios de Genética y Mejoramiento Vegetal . John Wiley & Sons Inc. ISBN 9781118313695.
- ^ M. Carmen Cañizares; Liz Nicholson; George P Lomonossoff (2005). "Uso de vectores virales para la producción de vacunas en plantas" . Inmunología y Biología Celular . 83 (3): 263–270. doi : 10.1111 / j.1440-1711.2005.01339.x . PMC 7165799 . PMID 15877604 .
- ^ "¿Cómo se hace una planta transgénica?" . Departamento de Ciencias del Suelo y Cultivos de la Universidad Estatal de Colorado .
- ^ Fütterer J .; Bonneville JM; Hohn T (mayo de 1990). "Virus del mosaico de la coliflor como vector de expresión génica para plantas". Physiologia Plantarum . 79 (1): 154-157. doi : 10.1111 / j.1399-3054.1990.tb05878.x .
- ^ Benfey PN, Chua NH (1990). "El promotor del virus 35S del mosaico de la coliflor: regulación combinatoria de la transcripción en plantas" (PDF) . Ciencia . 250 (4983): 959–66. Código Bibliográfico : 1990Sci ... 250..959B . doi : 10.1126 / science.250.4983.959 . PMID 17746920 . S2CID 35471862 .
- ^ Kishwar Hayat Khan (2013). "Expresión de genes en células de mamíferos y sus aplicaciones" . Adv Pharm Bull . 3 (2): 257–263. doi : 10.5681 / apb.2013.042 . PMC 3848218 . PMID 24312845 .
- ^ Berkner KL (1992). "Expresión de secuencias heterólogas en vectores adenovirales". Temas de actualidad en microbiología e inmunología . 158 : 39–66. doi : 10.1007 / 978-3-642-75608-5_3 . ISBN 978-3-642-75610-8. PMID 1582245 .
- ^ DE Hruby (1990). "Vectores del virus de la vacuna: nuevas estrategias para la producción de vacunas recombinantes" . Clin Microbiol Rev . 3 (2): 153-170. doi : 10.1128 / cmr.3.2.153 . PMC 358149 . PMID 2187593 .
- ^ Kim DW1, Uetsuki T, Kaziro Y, Yamaguchi N, Sugano S (1990). "Uso del promotor alfa del factor de alargamiento humano 1 como un sistema de expresión versátil y eficiente". Gene . 91 (2): 217-23. doi : 10.1016 / 0378-1119 (90) 90091-5 . PMID 2210382 .CS1 maint: varios nombres: lista de autores ( enlace )
- ^ Vinarov DA, Newman CL, Tyler EM, Markley JL, Shahan MN (2006). "Capítulo 5: Unidad 5.18. Sistema de expresión libre de células de germen de trigo para la producción de proteínas". Protocolos actuales en la ciencia de las proteínas . Capítulo 5. págs. 5.18.1–5.18.18. doi : 10.1002 / 0471140864.ps0518s44 . ISBN 9780471140863. PMID 18429309 . S2CID 12057689 .
- ^ Brödel AK1, Wüstenhagen DA, Kubick S (2015). "Sistemas de síntesis de proteínas libres de células derivados de células cultivadas de mamíferos". Proteómica estructural . Métodos en Biología Molecular. 1261 . págs. 129–40. doi : 10.1007 / 978-1-4939-2230-7_7 . ISBN 978-1-4939-2229-1. PMID 25502197 .CS1 maint: varios nombres: lista de autores ( enlace )
- ^ a b Shayne Cox Gad (2007). Manual de Biotecnología Farmacéutica . John Wiley e hijos. pag. 693. ISBN 978-0-471-21386-4.
- ^ Alexander Dorozynski (2002). "Los padres demandan por la hormona del crecimiento humana contaminada" . Revista médica británica . 324 (7349): 1294. doi : 10.1136 / bmj.324.7349.1294 / b . PMC 1123268 . PMID 12039815 .
- ^ Shayne Cox Gad (25 de mayo de 2007). Manual de Biotecnología Farmacéutica . John Wiley e hijos. pag. 738. ISBN 978-0-471-21386-4.
- ^ Bogdanich W, Koli E (22 de mayo de 2003). "2 caminos de la droga de Bayer en los años 80: más arriesgado dirigido al extranjero" . The New York Times : A1, C5. PMID 12812170 .
- ^ "bionetonline.org" . Archivado desde el original el 17 de junio de 2010 . Consultado el 12 de junio de 2010 .
- ^ "Terapia génica" . Proyecto Genoma Humano .
- ^ Ian Sample (17 de octubre de 2003). "Los médicos descubren por qué la terapia genética les dio cáncer a los niños" . Guardián .
- ^ Sarah Boseley (30 de abril de 2013). "Los ensayos pioneros de terapia génica ofrecen esperanza para los pacientes cardíacos" . Guardián .
- ^ Fischer, A .; Hacein-Bey-Abina, S .; Cavazzana-Calvo, M. (2010). "20 años de terapia génica para SCID". Inmunología de la naturaleza . 11 (6): 457–460. doi : 10.1038 / ni0610-457 . PMID 20485269 . S2CID 11300348 .
enlaces externos
- Manual del sistema GST Gene Fusion